服务步骤

主要内容

交付内容

交付时间

目的基因全基因合成

1. 从GenBank中寻找目的蛋白的cDNA序列。

2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子及mRNA二级结构的优化。

3. 合成设计好的基因序列。

目的基因（连接在T载体或其它常规克隆载体上）及测序报告。

2周

目的基因亚克隆到pFastBac供体质粒

1. 培养并抽提含有目的基因的载体质粒。

2. 将目的基因亚克隆到pFastBac供体载体上。

3. 测序验证构建质粒的准确性。

4. 通过中抽获得重组的质粒DNA。

正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。

2-3周

制备重组杆状病毒Bacmid DNA

1. 将重组的pFastBac供体质粒转化到大肠杆菌DH10Bac感受态菌株中。

2. 通过抗生素平板筛选出含有重组Bacmid的菌株。

3. 抽提质粒获得重组的杆状病毒Bacmid DNA。

重组杆状病毒Bacmid DNA，含重组质粒的DH10Bac菌株

2周

转染昆虫细胞Sf-9

1. 利用转染试剂将重组Bacmid质粒转入昆虫细胞Sf-9。

2. 收集成熟的重组杆状病毒并检测病毒的滴度。3. 通过多次感染提高病毒的滴度，并扩增病毒数量。

4. 通过SDS-PAGE和Western-blot检测目的蛋白表达情况。

高滴度重组杆状病毒，病毒滴度及蛋白表达检测结果（如果转染不成功，则不收取费用。如果没有检测到目的蛋白表达，则只收取50%实验费用）。

3周

目的蛋白表达及纯化

1. 培养500ml昆虫细胞至对数期，然后加入适量病毒感染细胞并表达目的蛋白。

2. 收集含有目的蛋白的部分（细胞或培养上清）。

3. 通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。

4. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。

5. 通过Western-blot验证目的蛋白正确性。

6. 可提供表达细胞株：Sf-9，Sf-9 Mimic，High Five。

纯化好的目的蛋白0.1~2mg及纯化报告。可按客户要求提供含纯化标签（Tag）或切除纯化标签（Tag）的最终蛋白，纯度可达80%以上。

2-3周

目的蛋白的再加工及详细检测

1. 内毒素去除，除菌，冻干等进一步加工。

2. 通过HPLC，质谱等方法详细检测目的蛋白的质量。

加工后的终产品及相关实验和检测报告。

2-3周

大规模制备

按照小试工艺放大生产规模，制备客户需要的合格蛋白产品。

合格的目的蛋白及服务报告。

协商